细胞划痕实验 Wound Healing 服务|实验技术服务

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测序实验流程：

细胞划痕实验（Wound Healing)是一种操作简单，经济实惠的研究细胞迁移/**侵袭的体外试验方法。这种方法的原理是，当细胞长到融合成单层状态时，在融合的单层细胞上人为制造一个空白区域，称为“划痕”。划痕边缘的细胞会逐渐进入空白区域使“划痕”愈合。 基本的步骤包括“划痕”的制造，细胞迁移期间图像的获得以及后期数据的处理。

特点：

1.  在一定程度上模拟了体内细胞迁移的过程。

2.  非常适合研究细胞与胞外基质（ECM），细胞与细胞之间相互作用引起的细胞迁移。

3.  与包括活细胞成像在内的显微镜系统兼容，可用于分析细胞间的相互作用。

4.  研究细胞迁移的体外实验中较简单的方法。

实验步骤：

1.  培养板接种细胞之前先用marker笔在12孔板背面画横线标记（方便拍照时定位同一 个视野）。

2.  细胞消化后接入12孔板，数量以贴壁后铺满板底为宜（数量少时可培养一段时间至铺满板底）。

3.  细胞铺满板底后，用1 ml枪头垂直于孔板制造细胞划痕，尽量保证各个划痕宽度一致。（人工枪头制造划痕难以保证划痕宽度的一致性，影响实验结果，这也是该方法较大的缺陷。）

4.  吸去细胞培养液，用PBS冲洗孔板三次，洗去划痕产生的细胞碎片。

5.  加入无血清培养基，拍照记录。

6.  将培养板放入培养箱培养，每隔4-6小时取出拍照。

7.  根据收集图片数据分析实验结果。

流程：

1.先用marker笔在6孔板背后，用直尺比着，均匀得划横线，大约每隔0.5~1cm一道，横穿过孔。每孔至少穿过5条线。

2.在空中加入约5X105个细胞，具体数量因细胞不同而不同，掌握为能铺满。

3.第二天用枪头比着直尺，尽量垂至于背后的横线划痕，枪头要垂直，不能倾斜。

4.用PBS洗细胞3次，去处划下的细胞，加入无血清培养基。

5.放入37度5%CO2培养箱，培养。按0，6，12，24小时取样，拍照。